Procedimientos de Recuperación y Recolección

Instructivo de Recolección de la Muestra

1. Al momento de firmar contrato con los padres, VidaCel® les entrega un kit de recolección (pequeña maleta de plástico) sellada con una etiqueta con código de barras. En su interior contiene:

• 2 bolsas plásticas grandes con cierre. La primera es para colocar la bolsa con la sangre de cordón recuperada. La segunda bolsa se utiliza para guardar el kit ya utilizado y listo para ser transportado.
• 4 hojas (formularios de parto, de recolección, de chequeo pre envío y guía de recolección abreviada.
• 1 tubo plástico de 10 ml dentro de una bolsa plástica pequeña con cierre para tomar una muestra de sangre materna destinada a realizar los exámenes de VDRL, Hepatitis B y C, HTLV 1-2, HIV, y Chagas.
• 1 campo fenestrado para manipular la placenta si la recolección se realiza después del alumbramiento (ex útero).
• 6 etiquetas con código de barras, para rotular la bolsa de sangre de cordón, el tubo con la muestra de sangre materna, los formularios de parto y el de recolección, para sellar el kit, y una de repuesto.

2. La embarazada llevará el Kit de Recolección VidaCel al momento de su ingreso a la Clínica u Hospital donde será atendido el parto vaginal o cesárea, avisando a la matrona recolectora a los teléfonos que figura en la etiqueta exterior del kit si el parto ocurre en Santiago.

3. Una vez que es seguro que ocurrirá el parto, o se haya decidido una operación cesárea, se entregará el Kit al Médico Obstetra o Matrona tratantes.

4. Es responsabilidad de los contratantes (la embarazada, su esposo o familiares cercanos) que el Kit de Recolección VidaCel® llegue a manos del Médico Obstetra o su matrona con la debida antelación y en perfecto estado de conservación, cerrado y con el sticker o sello intacto.

6. La recolección será llevada a cabo preferentemente por el Médico Obstetra que atiende a la embarazada siguiendo las normas que se detallan más abajo. En Santiago, si el profesional así lo desea, el procedimiento puede ser realizado por una matrona de VidaCel® especialmente entrenada al respecto.

Procedimiento de Recolección

1. En el caso de que la embarazada no tenga realizados sus exámenes serológicos (VDRL, Hepatitis B y C, HTLV 1-2, HIV, y Chagas), se procederá a realizar la extracción de 10 ml de sangre en el momento de colocación de la vía venosa en pabellón.

2. Esa muestra de sangre se colocará en el tubo plástico incluído con el kit VidaCel® para su procesamiento.

3. Abra la caja del Kit de Recolección VidaCel® y saque la bolsa que contiene la bolsa de recolección sin abrirla. Saque también el sobre con el campo fenestrado. Ubique ambos elementos donde puedan ser localizados rápida y fácilmente por sus colaboradores.

4. Recuerde que todo el procedimiento de recolección deberá realizarse en forma aséptica, con guantes estériles.

6. Seccione el cordón como lo hace habitualmente, pero más bien cerca del recién nacido.

7. Una vez que ha seccionado el cordón umbilical y separado al recién nacido, limpie el cordón con alcohol para evitar contaminar la recolección con sangre materna.

8. Desinfecte también con alcohol el sitio donde realizará la punción en la vena umbilical. Ese sitio estará cercano al extremo seccionado del cordón.

9. No vuelva a tocar la zona desinfectada.

10. Solicite que le presenten la bolsa de recolección en forma aséptica, para lo cual alguien deberá abrir la bolsa que la protege; lo usual es cortar dicha bolsa por el extremo que tiene la bajada con la aguja.

11. Tome la bolsa de recolección, desplace el clamp plástico que se encuentra en la bajada a una posición bien cercana a la bolsa, y haga un par de lazos flojos en la bajada; finalizada la recolección le servirán, completando y ajustando los nudos, para cerrar herméticamente la bolsa. Descubra la aguja quitándole su capuchón plástico, el que se desprende haciéndolo girar sobre sí mismo.

12. Sostenga tenso el cordón utilizando el clamp hemostático y canalice la vena umbilical en la zona desinfectada, insertando la aguja en el sentido de los vasos del cordón. Asegúrela de tal manera que no se desinserte cuando Ud. manipule la bajada o la bolsa.

13. Coloque la bolsa de recolección por debajo del plano del abdomen de la parturienta. Deje que por gravedad fluya la sangre dentro de la bolsa, ayudada por las contracciones uterinas; normalmente bastan menos de tres minutos para completar la recolección.

14. Lo ideal si se recolecta la sangre del cordón con la placenta in útero, es evitar un alumbramiento dirigido o precoz.

15. Con el fin de maximizar la recuperación de células madre, es conveniente no extraer sangre para determinación de grupo sanguíneo del cordón, sino que esa muestra obtenerla de los vasos de la placenta una vez ocurrido el alumbramiento.

16. Ayude a que se produzca la mezcla de la sangre con el anticoagulante mediante una gentil y continua agitación de la bolsa por parte de personal de pabellón.

17. Una vez que se detenga el flujo de sangre hacia la bolsa de recolección, ordeñar el cordón desde la placenta hacia distal puede aumentar el volumen recuperado.

18. Si el alumbramiento se produce antes de la recolección de la sangre de cordón, envuelva la placenta en el campo fenestrado estéril provisto con el Kit con la cara fetal dirigida hacia el mismo. Pase el cordón por la agujero que tiene en el centro el campo estéril y coloque todo en un plano elevado en relación al que ocupará la bolsa de recolección para que se produzca el drenaje de la sangre.

19. Limpie el cordón con alcohol para eliminar la sangre de la madre que pueda contaminar la recolección y proceda según los pasos 8 al 12 previamente descritos.

20. Ayude el drenaje de la sangre exprimiendo gentilmente a la placenta.

21. Si lo considera necesario clampee el cordón por encima del sitio de punción y más próximo a la placenta, elija un nuevo sitio de punción, limpie de sangre, desinfecte, clampee el tubo de bajada de la bolsa, retire la aguja y realice una nueva punción; a continuación desclampee la bajada para que fluya toda la sangre remanente.

22. Cuando se ha extraído toda la sangre el cordón se verá vacío y blanquecino.

23. Clampee la bajada de la bolsa de recolección, retire la aguja, envuélvala en gasa estéril para que actúe como "filtro estéril de aire" y desclampee entonces la bajada permitiendo que se vacíe el contenido de la misma dentro de la bolsa.

24. Una vez vacía la bajada clampee con el clamp plástico lo más cercanamente posible al cuerpo de la bolsa. Ajuste el lazo más cercano al extremo distal de la bajada y córtela vecino a la zona de unión con la aguja. Ajuste ahora el segundo lazo proximal a la bolsa. Descarte la placenta y el cordón umbilical.

25. Adhiera la etiqueta con código de barras a la bolsa con la sangre de cordón, coloque la bolsa con sangre dentro de la bolsa plástica con cierre e introdúzcala dentro de la caja del Kit

26. Complete todos los datos pedidos en los formularios de Recolección y Datos del Parto y colóquelos dentro de la bolsa con el kit VidaCel®. Realice ahora el chequeo pre envío, guarde las etiquetas autoadhesivas sobrantes, excepto una con la cual se debe cerrar el kit.

27. Entregue la caja cerrada al familiar de la puérpera para que sea remitido a VidaCel® Recuerde que si se ha extraído sangre a la madre, según se explica en los puntos 1 y 2, el tubo con la muestra de sangre se debe enviar dentro de la caja del Kit sin necesidad de refrigeración.

LA SANGRE DE CORDON DEBE PERMANECER A TEMPERATURA AMBIENTE (ENTRE 15ºC Y 25ºC) DESDE SU RECOLECCION HASTA SU RECEPCION EN EL LABORATORIO DE VIDACEL. NO LA COLOQUE EN REFRIGERADOR NI CON GELES ENFRIANTES.

Al recibir la caja del Kit de Recolección VidaCel® con las muestras y los documentos, ésta será revisada en presencia del portador y se confeccionará un documento por duplicado donde constará el inventario de lo que contiene la caja, el estado en que se encuentran las muestras a simple vista y el día y hora de recepción, y en los formularios se adherirán etiquetas con código de barras. Una copia firmada por el portador será archivada conjuntamente con la copia del contrato, y al portador se le entregará una copia firmada por el representante de VidaCel® que recibió la sangre de cordón y las muestras. Una vez completado el procesamiento de la muestra Ud. recibirá un informe completo del procedimiento llevado a cabo en nuestro Laboratorio. Ante cualquier duda comuníquese con VidaCel® .

Cómo se Recuperan las Células Madre en VidaCel®

VidaCel ® realiza en su laboratorio un cuidadoso proceso de selección por diferencias de densidad. Esta técnica permite separar y concentrar las células mononucleares que contienen las células madre. Estas células son tratadas con los crioprotectores Dimetilsulfóxido y Dextran 40 y almacenadas en bolsas plásticas especiales que se guardan a -196ºC después de ser sometidas a un sofisticado sistema de enfriamiento y congelación con un proceso computacional que garantiza su viabilidad posterior cuando sean descongeladas.

VidaCel® realiza las siguientes pruebas en cada caso:

1. A la sangre materna se le hacen pruebas de VDRL, antígenos de superficie de la Hepatitis B, anticuerpos para hepatitis C, HTLV 1 -2, anticuerpos para HIV y determinación de Chagas. Este grupo de pruebas identifica la existencia de enfermedades infecciosas potencialmente transmisibles por la sangre y permite a la sangre del cordón su potencial uso para la familia y no sólo como uso autólogo. En caso de que alguna de las pruebas resultara positiva, automáticamente se realiza una segunda prueba para confirmar la anterior.

2. Se realiza un hemocultivo a la muestra a congelar para descartar contaminación bacteriana.

3. Se determina la proporción del antígeno CD34 + lo que indica la cantidad de Células Madre presentes en la muestra.

4. El estudio de histocompatibilidad (HLA) no se realiza rutinariamente en el momento del procesamiento, ya que ello no es necesario para uso autólogo. Sin embargo, junto con la sangre de cordón VidaCel ® congela 2 viales de plasma y 2 de glóbulos rojos en caso de que la muestra se requiera para uso alogénico